冻存： 冻存的细胞应该是处于良好的状态。

按传代方法把细胞悬浮。

将悬浮的细胞进行1000转的低数离心，使细胞沉淀。

用含10%DMSO的完全培养基重新悬浮细胞，并把细胞混合液分装到冻存管中，管口最好用封口胶封住。

细胞逐步降温有两种方法：A.传统的先把盛放细胞混合液的冻存管放入4℃10分钟，然后放负20℃，之后是负80℃过夜，最后移入液氮罐保存。B. 把盛放细胞混合液的冻存管放入程序性降温盒，然后在盒子里灌满异丙醇，之后放入负80℃过夜，最后移入液氮罐保存。

复苏：

把从液氮罐里取出的冻存管迅速放入37℃的温水中，并不断摇晃冻存管，使其内部的细胞混合液融化。

将冻存管中的混合液移入15ml离心管中，打开冻存管之前要用酒精擦拭冻存管管口。在离心管内迅速加入10ml完全培养液，并轻轻吹打使细胞混匀。

1000转离心5分钟，弃上清，再加入10ml完全培养液，吹打混匀。

1000转离心5分钟，弃上清。加入6ml完全培养液，吹打混匀后移入培养瓶内正常培养。

第二天要给细胞换液。