传代： 一般贴壁细胞长满培养瓶培养面积的90%左右就应该对细胞进行传代。贴壁细胞长满培养面，就会产生接触抑制，影响细胞的状态。

对着酒精灯火焰打开细胞培养瓶，用移液管小心吸去培养液，注意移液管不要碰到细胞层，吸液时可将细胞瓶稍微倾斜。

吸取2-3ml PBS漂洗细胞，去掉残余血清并平衡盐离子。具体操作为：将PBS从背对着细胞层的一侧加入，倾斜培养瓶，让PBS溶液覆盖整个细胞表面，之后再把PBS溶液吸去。移液管注意不能碰到细胞层。

吸取1-1.5ml 25%胰酶加入培养瓶，将细胞从培养平面上消化下来。具体操作为：将胰酶从背对着细胞层的一侧加入，倾斜培养瓶，让胰酶溶液覆盖整个细胞表面，默数5s之后迅速把胰酶溶液吸去，残留大约0.2ml胰酶在培养瓶中。移液管注意不能碰到细胞层。将培养瓶盖上，左右倾斜培养瓶，让残余的一点点胰酶溶液再和细胞层反应。1min后轻轻拍打培养瓶侧面。如果肉眼能看见细胞层慢慢从培养平面脱落，则消化成功。否则，再加一点点新胰酶，重复操作。

吸去2ml左右完全DMEM培养液加入培养瓶，用移液管吸取培养液和残余胰酶混合物对着培养瓶底壁进行吹打，使以消化的细胞全部脱离瓶壁并分散开来。

根据培养的需要确定传代细胞的数量，将细胞悬浮液吸取到新的培养瓶中，再加入适量完全DMEM培养液，并再次吹打细胞。（培养液最终以盖住整个细胞培养瓶的培养面，深度3-4mm，并且不会沾染到培养瓶瓶口为准）

最后给新培养瓶做好标记，在超净台内将盖紧的培养瓶瓶盖旋松半圈，然后放入培养箱。培养瓶瓶盖旋松是为了让培养箱内气体能进入培养瓶。

培养： 不同细胞的培养条件略有不同，293细胞的培养条件是37℃，5%二氧化碳。细胞培养液中一般含有碳酸氢钠，通过跟二氧化碳的作用来维持培养液的Ph值。培养液中一般用酚红作为Ph指示剂，如果二氧化碳不通畅，培养液偏碱性，则呈现暗红色。二氧化碳通常，培养液偏酸性，呈现橙黄色。培养液偏碱性，会造成细胞无法生长或死亡。所以可以根据培养液颜色来判断瓶盖是否拧得过紧。细胞如果长时间不传代，每隔3天应该给细胞换次培养液。