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山东细胞实验:细胞的计数和铺板(以293细胞为例)

来源:山东细胞实验发布时间:2014-12-27 10:03:00

山东细胞实验:细胞的计数和铺板(以293细胞为例)
计数:
将细胞计数板和盖玻片清洗干净,并用擦镜纸吸去表面的水滴。
把盖玻片盖在细胞计数板的计数区域。
将细胞按传代方法悬浮,反复吹打细胞悬浮液使细胞分散均。取15微升左右的细胞悬浮液加入细胞从盖玻片和细胞板贴合的边缘加入,使其慢慢充满盖玻片与细胞板之间的空隙,注意不要留有气泡。
把细胞计数板放至显微镜下进行细胞计数。细胞计数板有上下两个区域,每个区域包含9个大格,每个大格又被划分为16个小格。选取一个大格,计数格中的细胞总数。压线的细胞只算上侧和左侧,不算右侧和下侧。每个大格的体积是0.1μl,换算可得悬浮液的细胞浓度。
铺板(以24孔板为例):
在24孔板每个板中加入0.5ml完全培养基。
将细胞悬浮液稀释至6×105个细胞/ml,然后用1ml的枪吸取0.5ml细胞,将手抬高至枪头离细胞板3到4cm,缓慢的逐滴滴入孔中。滴液过程注意对准同一个孔的不同位置,以便让细胞分散得更均匀。
每滴完一个孔后,应该盖上24孔板,将整个板在超净台平面,水平的前后左右的轻微振荡一下。注意不能把细胞液振到板盖或板子外面。
将接种好的24孔板放入培养箱培养。每个孔加入3×105个细胞,是使24孔板经过12小时培养就可以盖满整个底面的细胞数量,根据实验的不同要求,可以调整加入的细胞量。其他孔板按照底面积换算。